一、基本概念區(qū)分

• 原始標準菌株（第0代）：由權威保藏機構（如ATCC、CMCC、CGMCC等）提供，通常以凍干或超低溫形式保存。

• 儲備菌株（第1代）：由標準菌株首次活化后制備并冷凍保存，用于后續(xù)傳代。

• 工作菌株（第2–4代）：由儲備菌株傳代獲得，用于日常實驗或質量控制，傳代次數(shù)不得超過5代（依據(jù)《藥品微生物實驗室質量管理指導原則》9203）。

⚠️ 超過5代可能導致遺傳漂變、表型改變或喪失標準特性。

二、傳代前準備

物料平衡：

人員防護：

更換專用潔凈服，佩戴N95口罩、無菌手套；

三、標準傳代操作流程

步驟1：活化（第0代 → 第1代）

• 從凍存管（如-80℃甘油管或凍干管）中取菌；
• 接種至非選擇性固體培養(yǎng)基（如營養(yǎng)瓊脂斜面或平板）；
• 適宜溫度培養(yǎng)（如35±1℃，18–24小時）；
• 獲得第1代儲備菌株，部分用于保存，部分用于下一輪傳代。

步驟2：傳代培養(yǎng)（第1代 → 第2–4代工作菌株）

常用方法包括：

所有工具（接種環(huán)、針、移液器吸頭等）必須無菌，使用前后灼燒或更換。

四、記錄與標識

每支菌株必須標注并記錄以下信息：

• 菌種名稱（含屬、種、保藏編號，如 E. coli ATCC 25922）
• 傳代日期
• 當前代數(shù)（如P2、P3）
• 培養(yǎng)基類型與培養(yǎng)條件（溫度、時間、需氧/厭氧）
• 保藏位置（冰箱編號、凍存盒位置）
• 操作人簽名

建議使用電子或紙質《菌種傳代與使用記錄表》，實現(xiàn)全程可追溯。

五、保存與銷毀

• 短期保存：斜面4–6℃，保存數(shù)周至數(shù)月，需定期轉接；

• 長期保存：甘油管（-80℃）、冷凍干燥、液氮等；

• 銷毀：污染或超代菌株需經(jīng)121℃高壓滅菌30分鐘以上后廢棄。

六、關鍵法規(guī)依據(jù)（截至2025年）

• 《中國藥典》通則9203《藥品微生物實驗室質量管理指導原則》
• 《微生物實驗室菌株管理全流程規(guī)范》
• ISO 11133:2014（培養(yǎng)基質量控制）
• 各保藏中心（ATCC/CGMCC等）提供的說明書

總結：
從原始菌種到工作菌株，核心在于控制代數(shù)、防止污染、規(guī)范操作、完整記錄。只有嚴格遵循標準化流程，才能確保實驗結果的可靠性與合規(guī)性。

注：以上僅供參考，本試劑僅供科研使用，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。