一、OD與吸光度的關(guān)系
吸光度和透光率在光譜學(xué)中是經(jīng)常使用到的兩個(gè)術(shù)語。
吸光度(Absorbance,簡寫Abs或A),常用A表示,是指光束通過被測樣品時(shí),被測樣品對光的吸收量。
透光率(Transmittance,縮寫Tra或T),常用T%表示,相對吸光度說的,是指光束通過被測樣品時(shí),有一部分光被樣品吸收,穿透過的光的強(qiáng)度(P)和入射光的強(qiáng)度(P0)比值就是透光率,那么T=P/P0。
有人可能要問了,是不是A+P=P0,不是的,入射光中也有一部分因反射和散射而丟失的能量,那部分不在我們考慮范圍內(nèi)。
吸光度和透光率的關(guān)系用公式表示為:

其中,A是吸光度,T是透光率。
從公式中可以看出,吸光度和透光率是一一對應(yīng)關(guān)系,吸光度越高,那么透光率越低,反之,吸光度越低,透光率越高。
OD呢?
OD(optical density,縮寫為OD),稱光密度,此時(shí)也就是吸光度,在實(shí)際應(yīng)用中,因?yàn)槲舛仁俏镔|(zhì)對光的吸收量,習(xí)慣性用吸光度表達(dá)。所以,此時(shí)OD就是上述公式中的A。
三、為什么是600nm,不是500nm和700nm?
OD600是指將分光光度計(jì)的波長設(shè)定為600nm時(shí),測定的光密度值,是微生物發(fā)酵過程中常用的生物量測定方法之一,可以間接反映發(fā)酵液菌體濃度。OD600越高,菌液中細(xì)胞數(shù)量越多,反之,細(xì)胞數(shù)量越少。
那么,為什么要將分光光度計(jì)的波長設(shè)定為600nm來測定微生物發(fā)酵液中的OD值呢?
分光光度計(jì)在波長600nm處對濁度的反應(yīng)比較靈敏,所以,一般用波長600nm測定。
四、OD600可以測菌液濃度?
OD600正比于菌液濃度,OD值越高菌液濃度越高,OD值越低菌液濃度越低,他們成關(guān)系正相關(guān),而不是線性關(guān)系。
在平常試驗(yàn)中,我們總想復(fù)雜問題簡單化,簡單問題更簡單化,其實(shí)OD值和菌液濃度的關(guān)系一直也是比較關(guān)注的一個(gè)焦點(diǎn),為什么呢?
因?yàn)闇yOD值只需要用分光光度法度數(shù)就行,最多稀釋個(gè)倍數(shù),不用一分鐘肯定出結(jié)果,但菌液濃度可不一樣,菌液濃度是指一定體積內(nèi)某生物細(xì)胞或個(gè)體的數(shù)量,也就是活菌數(shù)(CFU/mL,菌落形成單位/mL),如何測定?
總之,沒一個(gè)簡單的。相對來說,血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)最簡單,但也比測OD值麻煩。
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