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一、 前提：制備一張合格的染色涂片
在談?wù)搮^(qū)分之前，必須確保你的“觀(guān)察對(duì)象”是清晰的。一張?jiān)愀獾耐科瑫?huì)讓你的一切努力白費(fèi)。
1、涂片薄而均勻：菌液量不宜過(guò)多，涂開(kāi)后在玻片上形成一層極薄的膜，風(fēng)干后再固定。過(guò)厚的涂片會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌堆積重疊，無(wú)法分辨單個(gè)形態(tài)。
2、染色對(duì)比鮮明：最常用的是革蘭氏染色。它不僅能將細(xì)菌分為G⁺（藍(lán)紫色）和G⁻（紅色），其結(jié)晶紫和沙黃（或番紅）的對(duì)比色能極大增強(qiáng)細(xì)菌與背景的反差，使輪廓更清晰。確保染色步驟正確，沖洗干凈，無(wú)染料沉淀。
3、油鏡的使用：必須使用100倍油鏡進(jìn)行觀(guān)察。低倍鏡無(wú)法看清細(xì)菌的詳細(xì)形態(tài)。
記住：成功的鏡檢始于成功的制片。
二、 核心區(qū)分要點(diǎn)：形態(tài)是唯一標(biāo)準(zhǔn)
拋開(kāi)所有復(fù)雜的生化反應(yīng)，最初的快速區(qū)分只依賴(lài)于一個(gè)最直觀(guān)的特征：形狀。
| 特征 | 球菌 | 桿菌 |
|---|---|---|
| 核心形態(tài) | 球狀或近似球狀 | 桿狀或棒狀 |
| 比喻 |
一堆乒乓球、玻璃珠 |
一根根短鉛筆、小雪茄 |
| 形態(tài)變體 |
可能存在輕微的卵圓形、豆形 |
長(zhǎng)短不一，有的短粗近似球桿狀，有的細(xì)長(zhǎng) |
| 排列方式 | 極具特征性
（見(jiàn)下文詳解） |
通常簡(jiǎn)單，多為單散、成對(duì)或鏈狀 |
三、 實(shí)戰(zhàn)四步鑒別法
請(qǐng)遵循以下流程，像偵探一樣進(jìn)行觀(guān)察和推理。
不要試圖分析視野中每一個(gè)顆粒�？焖賿咭曊麄�(gè)視野，尋找那些分離良好、未被其他細(xì)胞重疊、染色清晰的單個(gè)細(xì)菌作為你的“典型目標(biāo)”。重疊的菌團(tuán)會(huì)干擾判斷。
將注意力集中在一個(gè)“典型目標(biāo)”上，仔細(xì)調(diào)節(jié)微調(diào)焦螺旋，確保其輪廓清晰。
自問(wèn)：它是圓的嗎？
如果看起來(lái)像一個(gè)完美的圓點(diǎn)，或者一個(gè)小圓餅，那么它極有可能是球菌。
如果看起來(lái)是 elongated（拉長(zhǎng)的），即在一個(gè)方向上明顯比另一個(gè)方向長(zhǎng)，那么它一定是桿菌。
注意陷阱：有些短桿菌（如大腸桿菌在某些條件下）可能非常短粗，容易誤認(rèn)為球菌。此時(shí)進(jìn)入第三步。
排列方式是幫助確認(rèn)球菌的強(qiáng)力工具。桿菌很少形成復(fù)雜的排列。
如果懷疑是球菌，看它們?nèi)绾尉蹠?huì)：
成對(duì)出現(xiàn)：兩個(gè)球菌在一起——雙球菌（如肺炎鏈球菌）。
鏈狀排列：一串球菌像珍珠項(xiàng)鏈——鏈球菌。
葡萄串狀：一堆球菌無(wú)規(guī)則聚集——葡萄球菌。
四聯(lián)或八疊：四個(gè)成正方形或八個(gè)成立方體——四聯(lián)球菌或八疊球菌。
看到以上任何一種特征性排列，即可基本斷定是球菌。
對(duì)于桿菌：排列方式通常較簡(jiǎn)單，多為單散存在、成對(duì)（兩個(gè)桿菌首尾相接）或鏈狀（一長(zhǎng)串桿菌，如枯草芽孢桿菌）。它們不會(huì)形成葡萄串狀或四聯(lián)狀。
第四步：結(jié)合大小和背景進(jìn)行綜合判斷
相對(duì)大小：一般而言，球菌的直徑通常小于大多數(shù)桿菌的寬度。如果一個(gè)細(xì)菌看起來(lái)又“圓”又“胖”（比周?chē)那蚓黠@粗大），它很可能是一個(gè)短桿菌。
審視整個(gè)視野：不要只盯著一處。視野中絕大多數(shù)細(xì)菌的形態(tài)應(yīng)該是一致的（純培養(yǎng)情況下）。如果大部分細(xì)菌都是桿狀，那么幾個(gè)看起來(lái)像圓點(diǎn)的很可能是切面較短的桿菌，應(yīng)以主流形態(tài)為準(zhǔn)。
四、 常見(jiàn)誤區(qū)與高級(jí)技巧
誤區(qū)一：把雜質(zhì)或染料沉淀當(dāng)細(xì)菌。細(xì)菌有非常均勻的著色和規(guī)則的形態(tài)。雜質(zhì)往往形狀不規(guī)則、邊緣模糊、著色不均。多觀(guān)察，積累經(jīng)驗(yàn)即可輕松區(qū)分。
誤區(qū)二：過(guò)度依賴(lài)排列方式。某些桿菌（如棒狀桿菌）會(huì)呈“八字”或柵欄狀排列，不要因此誤認(rèn)為是球菌的復(fù)雜排列。始終回歸到單個(gè)細(xì)胞的形態(tài)這一根本上來(lái)。
高級(jí)技巧：利用焦距變化。輕輕上下調(diào)節(jié)微調(diào)焦螺旋，觀(guān)察細(xì)菌的形態(tài)變化。球菌在各個(gè)焦面上看起來(lái)都是圓的，而桿菌在焦距變化時(shí)，其“桿”的特征會(huì)更加明顯。
總結(jié)
熟練之后，這個(gè)過(guò)程幾乎成為一種條件反射。一眼望去，大腦就能自動(dòng)完成形狀識(shí)別和分類(lèi)。這份能力的背后，是無(wú)數(shù)次制片、觀(guān)察和經(jīng)驗(yàn)積累�，F(xiàn)在，就拿起你的標(biāo)本，從一枚清晰的革蘭氏染色涂片開(kāi)始實(shí)踐吧！
