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24孔板Transwell實驗的門道，但實際操作中總會遇到些小狀況。
一、細胞接種與生長問題
細胞生長不均或局部死亡
現(xiàn)象：換液后部分孔細胞死亡，形成"半圓分界線"。
原因：培養(yǎng)箱架子不水平導致液體分布不均;培養(yǎng)基溫度過低(如直接從4℃冰箱取出)造成冷休克。
解決：確保培養(yǎng)箱水平;將培養(yǎng)基提前在37℃培養(yǎng)箱平衡15-30分鐘。
細胞分布不均
現(xiàn)象：接種后細胞聚集在孔邊緣，細胞稀疏。
原因：加液方式不當導致液體表面張力效應; 培養(yǎng)基體積不足形成彎液面。
解決：使用多道移液器均勻加液;確保每孔加液量充足(通常500-650μL)。
二、Transwell小室操作問題
氣泡產(chǎn)生
現(xiàn)象：小室放入下室時產(chǎn)生氣泡，影響趨化梯度。
解決：放置后若見氣泡，用鑷子輕提小室去除，再放回。
基質(zhì)膠鋪板問題
現(xiàn)象：鋪膠后膠體不均勻或凝固不良。
解決：Matrigel基質(zhì)膠用無血清培養(yǎng)基按1:8比例稀釋，取60μL均勻鋪于上室，37℃孵育1-4小時。
三、污染與蒸發(fā)問題
現(xiàn)象：培養(yǎng)物污染或液體蒸發(fā)。
原因：培養(yǎng)板蓋子較松，利于氣體交換但增加污染和蒸發(fā)風險。
解決：保持培養(yǎng)箱內(nèi)清潔，放置無菌水槽維持濕度100%。
四、其他常見問題
細胞狀態(tài)不佳：接種前細胞應處于對數(shù)生長期，活力良好。
培養(yǎng)時間不當：根據(jù)細胞類型優(yōu)化時間。
換液操作不當：在通風櫥內(nèi)換液時，關(guān)閉風機或逐孔操作，避免氣流導致培養(yǎng)基快速蒸發(fā)。
