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1.1
三區(qū)平板劃線(xiàn)
三區(qū)劃線(xiàn)中第一區(qū)所占的區(qū)域大約是平板面積的五分之一到四分之一。第二區(qū)搭過(guò)第一區(qū)的面積使微生物數(shù)量得到“稀釋”，第三區(qū)搭過(guò)第二區(qū)的面積使微生物數(shù)量進(jìn)一步“稀釋”，第三區(qū)不可與第一區(qū)有重疊的劃線(xiàn)。一般適用于可疑菌落的分離，或可疑菌落的二次平板分離。通常劃完三區(qū)后就可以出現(xiàn)單菌落。三區(qū)劃線(xiàn)如下圖。
1.2
四區(qū)平板劃線(xiàn)與上面的三區(qū)劃線(xiàn)類(lèi)似，只是每一區(qū)的劃線(xiàn)面積相應(yīng)減小，同樣第三區(qū)不可與第一區(qū)相重疊，第四區(qū)不可與第二區(qū)和第一區(qū)相重疊，四區(qū)劃線(xiàn)比三區(qū)劃線(xiàn)多稀釋一次，這樣通過(guò)增加劃線(xiàn)區(qū)域，有可能會(huì)分離到更多更純的單菌落。
1.3
單次連續(xù)“之”字平板劃線(xiàn)
其實(shí)在微生物劃線(xiàn)接種中，無(wú)論是試管斜面劃線(xiàn)接種還是平板劃線(xiàn)接種，都會(huì)用到“之”字劃線(xiàn)。“之”字劃線(xiàn)的要領(lǐng)是：往復(fù)不間斷劃線(xiàn)，但是又不與劃過(guò)的路線(xiàn)重復(fù)或重疊。如果菌量比較大，就可以劃得更為密集或者增加一塊平板繼續(xù)“之”字劃線(xiàn)（即連續(xù)劃兩塊板）�！爸弊謩澗�(xiàn)一般適用于分離本身在此培養(yǎng)基上單一且黏性較大的菌類(lèi)或可疑菌落的純培養(yǎng)。操作如下圖所示。
1.4
網(wǎng)狀平板劃線(xiàn)
網(wǎng)狀平板花線(xiàn)，其實(shí)就是兩次方向垂直的“之”字劃線(xiàn)重疊在一起，一般用于純培養(yǎng)，目的是通過(guò)增加更多的劃線(xiàn)路徑來(lái)獲得更多的純培養(yǎng)物，特別是針對(duì)一些生長(zhǎng)較慢或菌落非常細(xì)小的菌類(lèi)。
在以上的這些平板劃線(xiàn)的方式中，三區(qū)平板劃線(xiàn)最常用的是分區(qū)劃線(xiàn)法，詳細(xì)步驟如下：
① 將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種還環(huán)燒紅。
② 在火焰旁冷卻接種換環(huán)，打開(kāi)試管塞。
③ 將試管口通過(guò)火焰，旋轉(zhuǎn)試管口并小幅度來(lái)回移動(dòng)試管，切不可長(zhǎng)時(shí)間讓試管口停滯于火焰上加熱。
④ 將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，挑取一環(huán)菌液。
⑤ 將試管口通過(guò)火焰幾次后，塞上試管塞。將試管放回試管架。
⑥ 左手拿起培養(yǎng)皿，將培養(yǎng)皿蓋打開(kāi)一條縫隙，右手將沾有菌液的接種環(huán)迅速深入平皿內(nèi)。從平皿邊緣開(kāi)始“之”字劃線(xiàn)（基準(zhǔn)線(xiàn)也稱(chēng)第一區(qū)域），大約劃過(guò)平皿的五分之一到四分之一左右的面積。關(guān)閉培養(yǎng)皿蓋，將培養(yǎng)皿調(diào)轉(zhuǎn)大約120°。再次灼燒接種環(huán)，將接種環(huán)在空氣中或靠在培養(yǎng)皿蓋內(nèi)側(cè)冷卻后從第一區(qū)域末端開(kāi)始往第二區(qū)內(nèi)劃線(xiàn)。兩個(gè)區(qū)域劃線(xiàn)的交角大約是120°。重復(fù)以上動(dòng)作，完成第三區(qū)（甚至第四區(qū)）劃線(xiàn)操作。注意：當(dāng)前操作的劃線(xiàn)只能與相鄰前一區(qū)域相交，絕不能與其他區(qū)域的劃線(xiàn)有重疊。
一般三區(qū)劃線(xiàn)就能分離出單菌落，第一區(qū)和第二區(qū)前部的細(xì)菌生長(zhǎng)成“直線(xiàn)”，第二區(qū)后部的細(xì)菌生長(zhǎng)呈“虛線(xiàn)”。第三區(qū)呈“虛線(xiàn)”和離散的“小點(diǎn)”（即單菌落）。
